IN VITRO / EX VIVO アッセイ
耳細胞株を用いたin vitroアッセイ
聴覚保護
シルケアのin vitroスクリーニングモデルは、短期間で大規模な薬剤候補ライブラリの聴覚保護特性の研究およびスクリーニングをすることが可能です。
アッセイは、マウスのコルチ器官から派生した不死化細胞株 HEI-OC1 が使用されます（カラインらによって2003年に発表された論文）。これらの細胞は初期段階のマウス蝸牛から採取されており、蝸牛の感覚細胞および支持細胞の特異的マーカーを発現します。HEI-OC1細胞株はこれまで250件以上の研究で使用されており、内耳研究における参照細胞株です。聴覚系は、非常に複雑な解剖構造を持ち、サイズが小さく、複数の骨層に包まれているため、スクリーニングにおいてこの細胞株は非常に価値のあるツールとされています。
NACによる聴覚保護
シルケアのモデルは、MTTアッセイとCCK8アッセイの両方で、N-アセチルシステイン（NAC）がシスプラチン損傷から保護する能力を実証しました。
NACによる特性評価
Cilcareのモデルは、シスプラチン誘発性聴器毒性におけるNACの作用機序が明らかになりました。NACは、カスパーゼ活性化を用量依存的に部分的に抑制し、活性酸素種（ROS）の産生を完全に抑制しました。
聴器毒性
シルケアのin vitroモデルは、早期段階で潜在的な聴器毒性化合物を特定するための信頼性の高いアッセイでもあります。
HEI-OC1細胞におけるシスプラチン聴器毒性
シスプラチンによる細胞代謝および定量化
化合物の潜在的な聴器毒性は、シスプラチンまたは他の参照となる聴器毒性薬と比較評価できます。アネキシン、カスパーゼ3-7および-8活性、およびROS産生によるアポトーシスに関する追加のアッセイも実施でき、薬剤候補の作用機序の理解を深めるためのデータが得られます。
聴覚保護および聴器毒性スクリーニングにおける多様な補完的評価項目
- 細胞生存率
- 細胞毒性
- 活性酸素種（ROS）産生
- アポトーシスとネクローシスの比較
- カスパーゼ3/7の活性化
- カスパーゼ8の活性化
- 細胞内カルシウム（Ca++）増加
- ミトコンドリア機能
- 細胞形態の変化
- サイトカイン産生
- トランスクリプトーム解析
このin vitroスクリーニングモデルは、Neuro-Zone 社との提携により提供されます。
